CRISPR: differenze tra le versioni

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'''CRISPR'''<ref>l'acronimo viene pronunciato "''crisper''" ({{cita web|url = http://www.nature.com/scitable/blog/bio2.0/editing_genomes_with_the_bacterial |titolo=Editing Genomes with the Bacterial Immune System |cognome= Sawyer |nome=Eric |giorno =9 || mese =febbraio | anno =2013 |sito=Scitable |accesso=6 aprile 2015 |editore=Nature Publishing Group |tipo= blog }}); al plurale, nella letteratura scientifica in lingua inglese, viene scritto ''CRISPRs''</ref> ('''clustered regularly interspaced short palindromic repeats''', traducibile in [[lingua italiana|italiano]]: Brevi ripetizioni palindrome raggruppate e separate a intervalli regolari<ref>[[Emmanuelle Charpentier]] e [[Pierre Kaldy]], «L'enzima che rivoluziona la genetico», ''[[Le Scienze]]'' n. 772, aprile 2016, pp. 28-35</ref>) è il nome attribuito a segmenti di [[DNA]] contenenti [[Sequenza ripetuta di DNA|brevi sequenze ripetute]], scoperti all'interno di [[Cellula procariote|cellule procariote]] (in passato, la terminologia era ''Short Regularly Spaced Repeats'', abbreviato in SRSR). Ogni ripetizione è seguita da brevi frammenti di DNA "distanziatore" generato da una passata esposizione del batterio a [[Virus batterico|virus batteriofagi]] o [[plasmidi]]<ref name="pmid20125085">{{cita pubblicazione|autore= Marraffini LA, Sontheimer EJ|titolo=CRISPR interference: RNA-directed adaptive immunity in bacteria and archaea|rivista=[[Nature Reviews Genetics]]|volume = 11|numero=3|pp=181–190|mese =marzo | anno = 2010|pmid = 20125085|pmc = 2928866|doi = 10.1038/nrg2749}}</ref>. Le sequenze CRISPR sono state rinvenute in circa il 40% dei genomi batterici e nel 90% dei genomi degli [[Archea]] sottoposti a [[Sequenziamento del DNA|sequenziamento]]<ref name="pmid17521438">{{cita pubblicazione|autore= Grissa I, Vergnaud G, Pourcel C|titolo=The CRISPRdb database and tools to display CRISPRs and to generate dictionaries of spacers and repeats|rivista=[[BMC Bioinformatics]]|volume = 8|pagina=172|anno=2007|pmid = 17521438|pmc = 1892036|doi = 10.1186/1471-2105-8-172}}</ref>.
'''CRISPR'''<ref>l'acronimo viene pronunciato "''crisper''" ({{cita web|url = http://www.nature.com/scitable/blog/bio2.0/editing_genomes_with_the_bacterial |titolo=Editing Genomes with the Bacterial Immune System |cognome= Sawyer |nome=Eric |giorno =9 || mese =febbraio | anno =2013 |sito=Scitable |accesso=6 aprile 2015 |editore=Nature Publishing Group |tipo= blog }}); al plurale, nella letteratura scientifica in lingua inglese, viene scritto ''CRISPRs''</ref> ('''clustered regularly interspaced short palindromic repeats''', traducibile in [[lingua italiana|italiano]]: Brevi ripetizioni palindrome raggruppate e separate a intervalli regolari<ref>{{cita pubblicazione | autore = [[Emmanuelle Charpentier]] e [[Pierre Kaldy]] | titolo = L'enzima che rivoluziona la genetica» | rivista = [[Le Scienze]] | numero = 772 | mese = aprile | anno = 2016 | pagine = 28-35}}</ref>) è il nome attribuito a segmenti di [[DNA]] contenenti [[Sequenza ripetuta di DNA|brevi sequenze ripetute]], scoperti all'interno di [[Cellula procariote|cellule procariote]] (in passato, la terminologia era ''Short Regularly Spaced Repeats'', abbreviato in SRSR). Ogni ripetizione è seguita da brevi frammenti di DNA "distanziatore" generato da una passata esposizione del batterio a [[Virus batterico|virus batteriofagi]] o [[plasmidi]]<ref name="pmid20125085">{{cita pubblicazione|autore= Marraffini LA, Sontheimer EJ|titolo=CRISPR interference: RNA-directed adaptive immunity in bacteria and archaea|rivista=[[Nature Reviews Genetics]]|volume = 11|numero=3|pp=181–190|mese =marzo | anno = 2010|pmid = 20125085|pmc = 2928866|doi = 10.1038/nrg2749}}</ref>. Le sequenze CRISPR sono state rinvenute in circa il 40% dei genomi batterici e nel 90% dei genomi degli [[Archea]] sottoposti a [[Sequenziamento del DNA|sequenziamento]]<ref name="pmid17521438">{{cita pubblicazione|autore= Grissa I, Vergnaud G, Pourcel C|titolo=The CRISPRdb database and tools to display CRISPRs and to generate dictionaries of spacers and repeats|rivista=[[BMC Bioinformatics]]|volume = 8|pagina=172|anno=2007|pmid = 17521438|pmc = 1892036|doi = 10.1186/1471-2105-8-172}}</ref>.


La funzione e l'importanza delle CRISPR sono state rivelate dalla scoperta dell'esistenza di un complesso di geni associati a tali sequenze, denominato ''Cas'' (contrazione di ''CRISPR-associated''), in grado di codificare per presunte proteine di [[nucleasi]] ed [[elicasi]], che sono enzimi in grado di tagliare il DNA. In questo modo, l'associazione '''CRISPR/Cas''' costituisce un [[sistema immunitario]] [[procariota|procariotico]] che conferisce resistenza nei confronti di elementi genetici estranei come [[plasmidi]] e [[Virus batterico|fagi]]<ref name="pmid17379808">{{cita pubblicazione|autore = Barrangou R, Fremaux C, Deveau H, Richards M, Boyaval P, Moineau S, Romero DA, Horvath P|titolo=CRISPR provides acquired resistance against viruses in prokaryotes|rivista=Science|volume = 315|numero=5819|pp=1709–1712|mese =marzo | anno = 2007|pmid = 17379808|doi = 10.1126/science.1138140}}</ref><ref name="pmid19095942">{{cita pubblicazione|autore= Marraffini LA, Sontheimer EJ|titolo=CRISPR interference limits horizontal gene transfer in staphylococci by targeting DNA|rivista=Science|volume = 322|numero=5909|pp=1843–1845|mese =dicembre | anno = 2008|pmid = 19095942|pmc = 2695655|doi = 10.1126/science.1165771}}</ref> e provvede, quindi, a una sorta di [[immunità adattativa|immunità acquisita]]. Le sequenze "distanziatrici" dei CRISPR riconoscono e tagliano questi elementi estranei con un meccanismo analogo alla [[RNA interference]] degli organismi [[eucariote|eucariotici]]<ref name="pmid20125085" <ref/>.
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==Meccanismo ==
==Meccanismo ==

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=== Acquisizione degli spaziatori ===

Quando un [[microbo]] è invaso da un [[virus]], la prima fase della [[risposta immunitaria]] è la cattura del DNA virale per inserirlo in un locus CRISPR nella forma di uno spaziatore. [[Cas1]] and Cas2 sono stati trovati in tutti e tre i tipi di sistemi immunitari CRISPR-Cas, il che indica che essi sono coinvolti nell'acquisizione degli spaziatori. Studi sulle mutazioni hanno confermato questa ipotesi, mostrando come la rimozione di [[cas1]] o cas2 ferma l'acquisizione di spaziatori senza influenzare la risposta immunitaria di CRISPR<ref name="pmid19120484"/><ref name="pmid23696746">{{cite journal | vauthors = Dugar G, Herbig A, Förstner KU, Heidrich N, Reinhardt R, Nieselt K, Sharma CM | title = High-resolution transcriptome maps reveal strain-specific regulatory features of multiple Campylobacter jejuni isolates | journal = PLoS Genetics | volume = 9 | issue = 5 | pages = e1003495 | date = May 2013 | pmid = 23696746 | pmc = 3656092 | doi = 10.1371/journal.pgen.1003495 }}</ref><ref name="pmid22160698">{{cite journal | vauthors = Hatoum-Aslan A, Maniv I, Marraffini LA | title = Mature clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats RNA (crRNA) length is measured by a ruler mechanism anchored at the precursor processing site | journal = Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America | volume = 108 | issue = 52 | pages = 21218–22 | date = Dec 2011 | pmid = 22160698 | pmc = 3248500 | doi = 10.1073/pnas.1112832108 |bibcode = 2011PNAS..10821218H }}</ref><ref name="pmid22402487">{{cite journal | vauthors = Yosef I, Goren MG, Qimron U | title = Proteins and DNA elements essential for the CRISPR adaptation process in Escherichia coli | journal = Nucleic Acids Research | volume = 40 | issue = 12 | pages = 5569–76 | date = Jul 2012 | pmid = 22402487 | pmc = 3384332 | doi = 10.1093/nar/gks216 }}</ref><ref name="pmid22558257">{{cite journal | vauthors = Swarts DC, Mosterd C, van Passel MW, Brouns SJ | title = CRISPR interference directs strand specific spacer acquisition | journal = PLOS ONE | volume = 7 | issue = 4 | pages = e35888 | year = 2012 | pmid = 22558257 | pmc = 3338789 | doi = 10.1371/journal.pone.0035888 |bibcode = 2012PLoSO...735888S }}</ref>.

Si è giunti alla caratterizzazione di molte proteine Cas1 e alla risoluzione della loro struttura<ref name="pmid21219465">{{cite journal | vauthors = Babu M, Beloglazova N, Flick R, Graham C, Skarina T, Nocek B, Gagarinova A, Pogoutse O, Brown G, Binkowski A, Phanse S, Joachimiak A, Koonin EV, Savchenko A, Emili A, Greenblatt J, Edwards AM, Yakunin AF | title = A dual function of the CRISPR-Cas system in bacterial antivirus immunity and DNA repair | journal = Molecular Microbiology | volume = 79 | issue = 2 | pages = 484–502 | date = Jan 2011 | pmid = 21219465 | pmc = 3071548 | doi = 10.1111/j.1365-2958.2010.07465.x }}</ref><ref name="pmid19427858">{{cite journal | vauthors = Han D, Lehmann K, Krauss G | title = SSO1450--a CAS1 protein from Sulfolobus solfataricus P2 with high affinity for RNA and DNA | journal = FEBS Letters | volume = 583 | issue = 12 | pages = 1928–32 | date = Jun 2009 | pmid = 19427858 | doi = 10.1016/j.febslet.2009.04.047 }}</ref><ref name="pmid19523907">{{cite journal | vauthors = Wiedenheft B, Zhou K, Jinek M, Coyle SM, Ma W, Doudna JA | title = Structural basis for DNase activity of a conserved protein implicated in CRISPR-mediated genome defense | journal = Structure | volume = 17 | issue = 6 | pages = 904–12 | date = Jun 2009 | pmid = 19523907 | doi = 10.1016/j.str.2009.03.019 }}</ref>. Le proteine Cas1 hanno varie sequenze di [[amminoacidi]]. Tuttavia, le loro strutture cristalline sono simili e tutte le proteine Cas1 purificate sono [[nucleasi]]/[[integrasi]] metallo-dipendenti che si legano al DNA in modo indipendente dalla sequenza<ref name="pmid22337052" />. Sono state caratterizzate rappresentative proteine Cas2 e si è visto che esse posseggono specifica attività di [[endoribonucleasi]] ssRNA<ref name="pmid18482976">{{cite journal | vauthors = Beloglazova N, Brown G, Zimmerman MD, Proudfoot M, Makarova KS, Kudritska M, Kochinyan S, Wang S, Chruszcz M, Minor W, Koonin EV, Edwards AM, Savchenko A, Yakunin AF | title = A novel family of sequence-specific endoribonucleases associated with the clustered regularly interspaced short palindromic repeats | journal = The Journal of Biological Chemistry | volume = 283 | issue = 29 | pages = 20361–71 | date = Jul 2008 | pmid = 18482976 | pmc = 2459268 | doi = 10.1074/jbc.M803225200 }}</ref> o dsDNA]ref name="pmid21139194">{{cite journal | vauthors = Samai P, Smith P, Shuman S | title = Structure of a CRISPR-associated protein Cas2 from Desulfovibrio vulgaris | journal = Acta Crystallographica. Section F, Structural Biology and Crystallization Communications | volume = 66 | issue = Pt 12 | pages = 1552–6 | date = Dec 2010 | pmid = 21139194 | pmc = 2998353 | doi = 10.1107/S1744309110039801 }}</ref><ref name="pmid22942283">{{cite journal | vauthors = Nam KH, Ding F, Haitjema C, Huang Q, DeLisa MP, Ke A | title = Double-stranded endonuclease activity in Bacillus halodurans clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)-associated Cas2 protein | journal = The Journal of Biological Chemistry | volume = 287 | issue = 43 | pages = 35943–52 | date = Oct 2012 | pmid = 22942283 | pmc = 3476262 | doi = 10.1074/jbc.M112.382598 }}</ref>.


== Note ==
== Note ==

Versione delle 15:09, 13 mag 2016

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Diagramma del possibile meccanismo di CRISPR.
CRISPR Cas9 e editing del genoma

CRISPR[1] (clustered regularly interspaced short palindromic repeats, traducibile in italiano: Brevi ripetizioni palindrome raggruppate e separate a intervalli regolari[2]) è il nome attribuito a segmenti di DNA contenenti brevi sequenze ripetute, scoperti all'interno di cellule procariote (in passato, la terminologia era Short Regularly Spaced Repeats, abbreviato in SRSR). Ogni ripetizione è seguita da brevi frammenti di DNA "distanziatore" generato da una passata esposizione del batterio a virus batteriofagi o plasmidi[3]. Le sequenze CRISPR sono state rinvenute in circa il 40% dei genomi batterici e nel 90% dei genomi degli Archea sottoposti a sequenziamento[4].

La funzione e l'importanza delle CRISPR sono state rivelate dalla scoperta dell'esistenza di un complesso di geni associati a tali sequenze, denominato Cas (contrazione di CRISPR-associated), in grado di codificare per presunte proteine di nucleasi ed elicasi, che sono enzimi in grado di tagliare il DNA. In questo modo, l'associazione CRISPR/Cas costituisce un sistema immunitario procariotico che conferisce resistenza nei confronti di elementi genetici estranei come plasmidi e fagi[5][6] e provvede, quindi, a una sorta di immunità acquisita. Le sequenze "distanziatrici" dei CRISPR riconoscono e tagliano questi elementi estranei con un meccanismo analogo alla RNA interference degli organismi eucariotici[3].

Per queste sue caratteristiche, il sistema CRISPR/Cas è stato usato per l'ingegneria genetica (aggiungendo, rimuovendo o cambiando la sequenza di geni specifici) e per la regolazione genica di molte specie[7]. Portando la proteina Cas9 e gli appropriati RNA guida (gRNA) nelle cellule, il genoma dell'organismo può essere tagliato in qualsiasi punto in maniera estremamente precisa e con una tecnica semplice che richiede attrezzature relativamente economiche[8].

Inoltre, CRISPR è stato modificato per creare fattori di trascrizione programmabili che permettono di attivare o silenziare specifici geni[9].

CRISPR apre la strada a numerose applicazioni, compresa l'alterazione dell'impronta genetica degli esseri umani e del bestiame da allevamento e la manipolazione dei raccolti, ma le prospettive potenziali di questo potente metodo sollevano importanti questioni etiche[10].

Storia della scoperta

Diagramma semplificato di un locus CRISPR, di cui sono mostrate i tre componenti principali: geni cas, una sequenza guida, e un array di ripetizione-spaziatore. Le ripetizioni sono mostrate come scatole grigie mentre gli spaziatori come barre colorate. La disposizione delle tre componenti non è sempre come mostrato[11][3]. In aggiunta, in un singolo genoma possono essere presenti molti CRISPRs con un simile DR[non chiaro], uno solo dei quali è associato con geni cas[4].

CRISPR fa parte di un processo biologico che, sebbene oggetto di studi solo negli ultimi decenni del XX secolo, appare di norma nei batteri: questi, infatti, possono incorporare nella cellula, in altre circostanze, frammenti di DNA estranei al genoma originario e perfino raccattare DNA danneggiato dall'ambiente esterno[12]

Cluster ripetuti sono stati descritti per la prima volta nel 1987 per il batterio Escherichia coli a opera di Yoshizumi Ishino, ma a quell'epoca la loro funzione non era conosciuta[13] Nel 2000 furono identificate simili ripetizioni in altri batteri e archebatteri a cui fu dato il nome di Short Regularly Spaced Repeats (SRSR)[14]. Gli SRSR furono rinominati in CRISPR nel 2002[15]. Si è scoperto che un insieme di questi geni è associato con le ripetizioni CRISPR: i componenti di tale insieme sono stati chiamati geni cas (CRISPR-associated). I geni cas codificano per presunte proteine di nucleasi o elicasi, che sono enzimi in grado di tagliare il DNA[15].

Nel 2005, tre gruppi di ricerca indipendenti mostrarono che alcuni spaziatori di CRISPR provenivano da DNA di fagi e da DNA extracromosomico come plasmidi[16][17][18]. In effetti, gli spaziatori sono frammenti di DNA raccolti da virus che, in precedenza, avevano cercato di attaccare la cellula. La provenienza degli spaziatori era il segno di un ruolo che il sistema CRISPR/cas aveva nella immunità adattativa nei batteri[11][19]. Koonin e colleghi proposero che gli spaziatori funzionassero come un modello per le molecole di RNA, analogo a un sistema chiamato RNA interference usato nelle cellule eucariote[20].

Nel 2007, Barrangou e Horvath (ricercatori dell'industria alimentare, in forza alla Danisco), insieme al gruppo di Moineau all'Université Laval (Canada), mostrarono che si poteva usare DNA spaziatore per alterare la resistenza dello Streptococcus thermophilus agli attacchi di fagi[20].

Jennifer Doudna ed Emmanuelle Charpentier, in modo indipendente tra loro, hanno sfruttato le proteine associate a CRISPR per comprendere come i batteri usano gli spaziatori nelle loro difesa immunitaria[21] Hanno studiato in modo congiunto un sistema CRISPR più semplice, che si affida a una proteina chiamata Cas9. Hanno scoperto che il batterio risponde a un fago invasore trascrivendo gli spaziatori e le sequenze palindromiche di DNA in una lunga molecola di RNA. La cellula, allora, usa crRNA transattivante (tracrRNA-trans-activating crRNA) e Cas9 per tagliare questa lunga molecola di RNA in pezzi chiamati crRNAs[20].

Cas9 è una nucleasi, un enzima specializzato nel taglio del DNA. Ha due siti di taglio attivi (HNH and RuvC), uno per ciascun filamento della doppia elica di DNA. Il team di Doudna e Charpentier ha dimostrato che essi possono disabilitare uno o entrambi i siti, mentre preservano la capacità di Cas9 nel puntare sul suo DNA obiettivo. Jinek ha combinato tracrRNA e RNA spaziatore in un molecola di "RNA a guida singola" che, unita a Cas9, riusciva a trovare e tagliare i corretti DNA bersaglio. Jinek et al hanno proposto l'uso di questi RNA guida sintetici per l'editing genetico[20].

Nel 2012 si è avuta la prima prova che CRISPR potesse essere usato per ingegneria genetica e l'editing del genoma in colture cellulari umane[22][23]. Da allora è stato impiegato in un ampio spettro di organismi tra cui il lievito di birra (Saccharomyces cerevisiae)[24], pesce zebra (Danio rerio)[25], moscerino della frutta (Drosophila melanogaster)[26], axolotl (A. mexicanum)[27], nematodi (Caenorhabditis elegans)[28], piante[29], topi[30] scimmie[31], embrioni umani non vitali[32], e altri organismi viventi.

Inoltre, CRISPR è stato modificato per creare fattori di trascrizione programmabili che permettono agli scienziati di indirizzarsi verso specifici geni bersaglio da silenziare o attivare[9].

Sono disponibili librerie di decine di migliaia di RNA guida[20].

Predecessori

Nei primi anni 2000, la ricerca aveva sviluppato la nucleasi a dita di zinco, proteine sintetiche i cui DNA-binding domains le rendono in grado di creare rotture del doppio filamento del DNA in specifici punti; nel 2010, le nucleasi sintetiche chiamate TALEN (Transcription activator-like effector nuclease) hanno fornito un modo più facile per indirizzare la rottura del doppio filamento verso posizioni specifiche del DNA. Tuttavia, sia la nucleasi a dita di zinco, sia le TALEN, richiedono la sintesi di proteine personalizzate per ogni sequenza target di DNA, con un processo più complesso rispetto agli RNA guida e e più dispendioso in termini di tempo.

Al confronto, i CRISPRs sono molto più facili da progettare perché richiedono solo una breve sequenza di RNA che è associata alla sequenza del DNA che si vuole colpire, la cui sintesi è molto più semplice rispetto a quella di un'intera proteina personalizzata[33].

Struttura dei loci

Ripetizioni e spaziatori

I loci CRISPR, lunghi da 24 a 48 coppie di basi, possiedono in genere qualche simmetria diadica; questo implica la formazione di una struttura secondaria a forcina per capelli (stem-loop), ma non sono davvero palindrome[34]. Le ripetizioni sono separate da distanziatori di lunghezza simile[35]. Alcune sequenze spaziatrici CRISPR corrispondono esattamente a quelle provenienti da plasmidi e fagi[16][17][18], ma qualcuna corrisponde genoma procariotico stesso (self-targeting spacers)[16][36]. Nuovi spaziatori possono essere rapidamente aggiunti come parte della risposta immunitaria a infezioni di fagi[37].

Geni Cas e sottotipi CRISPR

I geni CRISPR-associated (cas) sono spesso associati a sequenze di ripetizioni-spaziatori CRISPR. La genomica comparativa ha identificato geni cas molteplici: un'analisi iniziale di 200 genomi di batteri e archeobatteri ha suggerito l'esistenza di almeno 45 famiglie di geni cas. Solo i geni cas1 e cas2 sono presenti in tutte e 45 le famiglie[35]. Allo stato attuale (2015) la classificazione dei CRISPR raggruppa gli operoni in tre suddivisioni principali, ciascuna con suddivisioni multiple basate sulla filogenesi di cas1 e sul complemento dell'operone cas[38]. Oltre a cas1 e cas2, gli operoni di ciascuna divisione principale hanno in comune un insieme di geni costituenti. Ciascuna suddivisione è caratterizzata da un "gene firma" (signature gene) che si trova solo in quella suddivisione. Molti organismi contengono sistemi multipli di tipo CRISPR-Cas, il che suggerisce che essi sono compatibili e possono condividere componenti[39][40] La distribuzione sporadica dei sottotipi CRISPR/Cas suggerisce che il sistema CRISPR/Cas sia soggetto a trasferimento orizzontale di geni durante l'evoluzione dei microbi.

Meccanismo

Acquisizione degli spaziatori

Quando un microbo è invaso da un virus, la prima fase della risposta immunitaria è la cattura del DNA virale per inserirlo in un locus CRISPR nella forma di uno spaziatore. Cas1 and Cas2 sono stati trovati in tutti e tre i tipi di sistemi immunitari CRISPR-Cas, il che indica che essi sono coinvolti nell'acquisizione degli spaziatori. Studi sulle mutazioni hanno confermato questa ipotesi, mostrando come la rimozione di cas1 o cas2 ferma l'acquisizione di spaziatori senza influenzare la risposta immunitaria di CRISPR[41][42][43][44][45].

Si è giunti alla caratterizzazione di molte proteine Cas1 e alla risoluzione della loro struttura[46][47][48]. Le proteine Cas1 hanno varie sequenze di amminoacidi. Tuttavia, le loro strutture cristalline sono simili e tutte le proteine Cas1 purificate sono nucleasi/integrasi metallo-dipendenti che si legano al DNA in modo indipendente dalla sequenza[39]. Sono state caratterizzate rappresentative proteine Cas2 e si è visto che esse posseggono specifica attività di endoribonucleasi ssRNA[49] o dsDNA]ref name="pmid21139194"> Samai P, Smith P, Shuman S, Structure of a CRISPR-associated protein Cas2 from Desulfovibrio vulgaris, in Acta Crystallographica. Section F, Structural Biology and Crystallization Communications, vol. 66, Pt 12, Dec 2010, pp. 1552–6, DOI:10.1107/S1744309110039801.</ref>[50].

Note

  1. ^ l'acronimo viene pronunciato "crisper" ( Eric Sawyer, Editing Genomes with the Bacterial Immune System (blog), su Scitable, Nature Publishing Group, 9 febbraio 2013. URL consultato il 6 aprile 2015.); al plurale, nella letteratura scientifica in lingua inglese, viene scritto CRISPRs
  2. ^ Emmanuelle Charpentier e Pierre Kaldy, L'enzima che rivoluziona la genetica», in Le Scienze, n. 772, aprile 2016, pp. 28-35.
  3. ^ a b c Marraffini LA, Sontheimer EJ, CRISPR interference: RNA-directed adaptive immunity in bacteria and archaea, in Nature Reviews Genetics, vol. 11, n. 3, marzo 2010, pp. 181–190, DOI:10.1038/nrg2749, PMC 2928866, PMID 20125085.
  4. ^ a b Grissa I, Vergnaud G, Pourcel C, The CRISPRdb database and tools to display CRISPRs and to generate dictionaries of spacers and repeats, in BMC Bioinformatics, vol. 8, 2007, p. 172, DOI:10.1186/1471-2105-8-172, PMC 1892036, PMID 17521438.
  5. ^ Barrangou R, Fremaux C, Deveau H, Richards M, Boyaval P, Moineau S, Romero DA, Horvath P, CRISPR provides acquired resistance against viruses in prokaryotes, in Science, vol. 315, n. 5819, marzo 2007, pp. 1709–1712, DOI:10.1126/science.1138140, PMID 17379808.
  6. ^ Marraffini LA, Sontheimer EJ, CRISPR interference limits horizontal gene transfer in staphylococci by targeting DNA, in Science, vol. 322, n. 5909, dicembre 2008, pp. 1843–1845, DOI:10.1126/science.1165771, PMC 2695655, PMID 19095942.
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Bibliografia

Voci correlate

Collegamenti esterni

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