La Serie A1 2000-2001 è stata l'82ª edizione del massimo livello del Campionato italiano maschile di pallanuoto.
Come nella stagione precedente, si sono affrontate in finale Posillipo e Florentia, con i napoletani che hanno conquistato il decimo titolo nazionale della loro storia. I Play-out a eliminazione diretta hanno sancito la retrocessione di Pescara e Telimar Palermo, ma le due squadre sono state in seguito ripescate per l'allargamento della serie A1 a 16 squadre.