Buffer TBE

Da Wikipedia, l'enciclopedia libera.

Il buffer TBE è spesso usato nella preparazione di gel elettroforetici di agarosio per la separazione di frammenti di DNA risultanti dall'amplificazione di PCR, da protocolli di purificazione e da esperimenti di clonaggio.

È composto da una soluzione di Tris-borato-EDTA, e l'EDTA sequestra i cationi bivalenti. Il buffer TBE è particolarmente utile nella separazione di piccoli frammenti di DNA (peso molecolare < 1000), ad esempio piccoli prodotti risultanti dalla digestione con enzimi di restrizione.

Il TBE ha una migliore capacità tamponante e fornisce una più accurata risoluzione del buffer TAE. Il TBE è generalmente più costoso del TAE ed inibisce la DNA ligasi che può causare problemi nel caso si volesse procedere con la purificazione o la ligazione del DNA.

Preparazione[modifica | modifica sorgente]

Per preparare 1 litro di TBE ICI 10X (impiegato nei gel di agarosio) si usano:

Il pH dello stock dovrebbe essere 8,8.

Per preparare 1 litro di TBE 10X (impiegato nei gel di acrilamide) si usano:

  • 107,81 g Tris base (tris(idrossimetil)amminometano)
  • 55,04 g acido borico
  • 3,72 g EDTA sale disodico
  • H2O a volume finale di 1000 ml

Il pH dello stock dovrebbe essere 8,3.

Il sale disodico dell'EDTA non si solubilizza fino a che la soluzione non abbia raggiunto un pH di circa 8,0 tramite l'aggiunta di NaOH.

Voci correlate[modifica | modifica sorgente]

elettrochimica Portale Elettrochimica: accedi alle voci di Wikipedia che trattano di elettrochimica